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如何正確及時的沖洗色譜柱?

更新時間:2021-02-01瀏覽:3241次

  正確及時的沖洗色譜柱?
 
  開始試驗前,應了解柱中當前是何種溶劑。對于新色譜柱,如無特殊說明均為評價報告中所用流動相。柱中當前溶劑一定要與分析樣品所用流動相互溶,如不能混溶,要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡。異丙醇是能與各種溶劑混溶的試劑,可作為中介流動相使用。反相鍵合硅膠柱適宜的保存環境是純甲醇,如分析用流動相為緩沖液2有機溶劑,可先用較低甲醇含量(<20%)的甲醇2水置換掉原來的純甲醇,再進分析用流動相,以防止在柱內發生鹽的沉淀;試驗結束后,要及時用適當的溶劑沖洗系統并終過渡到純甲醇沖洗,對于含有緩沖鹽的流動相,辦法是先用與分析用流動相組成*相同但不含緩沖鹽的溶液進行沖洗,再逐步過渡到純甲醇沖洗。多數報道沖洗液體積大約為柱容積的15~20倍,但終要以基線是否平直、壓力是否穩定決定。有些廠家的色譜柱標明了流動相中有機相的較低使用濃度為≥5%,使用時應給予注意。
 
  注意溫度和酸堿度
 
  一般以硅膠為基質的色譜柱使用溫度不超過60℃,以低于40℃為宜,特別是在流動相pH接近使用限度時,更應降低使用溫度。溫度過高會加快鍵合相的水解和硅膠的溶解,從而,使填料性質改變,柱床塌陷,降低柱效,改變峰形。目前的鍵合硅膠色譜柱標示的pH適用范圍可達2~10,但在實際使用時應避免pH條件,特別是在偏堿性的條件(pH≥8)下使用,如必須要在不正常的pH條件下使用時,可通過以下方法避免柱損害:
 
  (1)在泵和進樣閥之間加裝預柱(飽和柱)來飽和流動相;
 
  (2)降低使用溫度;
 
  (3)檢驗完畢后立即用與所使用的流動相互相混溶的“溫和溶劑”*清洗;

 

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